Matthieu Longatte commence le théâtre au collège dans les Yvelines, avant d'être sélectionné dans l’équipe des juniors de Trappes, championne de France d’improvisation Junior. Àpartir de 2006, il joue des spectacles d’improvisation dans les cafés-théâtres parisiens au sein de la troupe Prodiges. En 2010, il joue dans Donoma, film réalisé avec 150 euros qui bénéficie d’une promotion virale et fait le buzz sur Internet. Sélectionnéà l’ACID, il remporte par la suite le prix Louis Delluc du Meilleur premier film.
En 2012, Matthieu Longatte obtient le prix du Meilleur second rôle au Festival de Washington pour le long métrage Celui qui pleure a perdu de Marion Lefevre. En 2014, il se lance dans l’écriture avec sa chronique humoristique engagée Bonjour Tristesse, diffusée sur YouTube. En 2016, il interprète le premier rôle masculin du film Heis (Chroniques) d’Anaïs Volpéet joue dans la série Craignos de Jean-Pascal Zadi. Il reprend d’ailleurs son rôle de Guibole dans Carrément Craignos. En 2018, il écrit et joue son premier one-man-show, État des Gueux, puis écrit et réalise en 2019 la première saison de la série Narvalo pour Canal+. En 2019, il joue dans le long-métrage Mon frère, de Julien Abraham.
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